جداسازی، همسانه سازی و بیان توالی جزیی ژن آمیلاز در باکتری بومی exiguobacterium sp. sh3

thesis
abstract

بیش از 30 درصد از آنزیم های تولید شده در دنیا متعلق به خانواده آمیلازها است. در صنایع مختلفی مانند نساجی، صنایع هیدرولیز نشاسته، تولید شربت های شیرین و غیره، آنزیم آمیلاز نقش کلیدی دارد. از آنجا که بهینه دمای فعالیت آمیلازهای موجود در صنعت معمولا بالا است و بالا بردن دما جهت رسیدن به دمای بهینه فرایندی انرژی خواه است، لذا استفاده از آمیلازهای سرمادوست در صنعت رو به افزایش است. هدف اصلی این تحقیق پیدا کردن منبع ژنی آمیلاز جدید از باکتری کمتر شناخته شده بومی ایران است. برای این منظور باکتری اگزیگواباکتریوم sp. sh3 انتخاب شد. این باکتری برای اولین بار توسط پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری جداسازی و ثبت شده است. برای پیدا کردن ژن آمیلاز از این باکتری سرمادوست، از تکنیک های ساخت کتابخانه ژنی و انجام واکنش زنجیره پلیمراز به وسیله آغازگرهای لغزشی استفاده شد. طی این تحقیق تکنیک دقیق ساخت کتابخانه ژنومی برای این باکتری ارائه گردید. همچنین با استفاده از آغازگرهای لغزشی توالی جزیی ژن آمیلاز این باکتری جداسازی شد. برای بیان این توالی جزیی از ناقل پلاسمیدی pqe استفاده شد. همچنین پس از دست یابی به توالی کامل، همسانه سازی ژن مورد مطالعه در ناقل pet 26b انجام شد. پس از القای بیان و با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل، پروتئین نوترکیب خالص سازی شد. آزمون های بیوشیمیایی نمایان نمود که ph بهینه برای فعالیت این آنزیم 5/6 است. همچنین km و vm این آنزیم به ترتیب برابر 264165/0 و 52833/0 محاسبه شد. در پایان مدل سه بعدی این آنزیم به روش های تشخیص فولد و مدل مخفی مارکوو شبیه سازی شد و به وسیله موتاسیون مجازی و داک گذاری سعی گردید تا تمایل مدل سه بعدی آمیلاز به نشاسته افزایش یابد. این تحقیق پیشنهاد می کند که با اعمال موتاسیون های مجازی عنوان شده در شرایط آزمایشگاه می توان به آنزیم فعال تری دست پیدا کرد.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

همسانه سازی و بیان ژن کد کننده آنزیم بتا گلوکوزیداز از باکتری exiguobacterium sp. sh3

سلولز به عنوان فراوان¬ترین ماده آلی قابل تجزیه، شامل پلیمرهای خطی متشکل از واحدهای گلوکز با پیوندهای بتا 1 و4 گلیکوزیدی می¬باشد که می¬تواند به عنوان بهترین ذخیره برای تولید انرژی، غذا و مواد شیمیایی مورد نیاز انسان در نظر گرفته شود. هیدرولیز کامل آنزیمی مواد سلولزی نیازمند همکاری سه آنزیم اندوگلوکاناز، اگزوگلوکاناز و بتاگلوکوزیداز است. تا به امروز ژن¬های بتاگلوکوزیداز با ویژگی¬های مختلف از انوا...

همسانه سازی و بیان ژن کد کننده ی سلوبیاز (بتاگلوکوزیداز) از باکتری سرما دوست exiguobacterium sp. sh3 در e.coli

سلولزبهعنوانفراوان ترینمادهآلیقابل تجزیه،شامل پلی مرهای خطی متشکلازواحدهایگلوکزباپیوندهایبتا 1و4گلیکوزیدیمی باشدکهمی تواندبهعنوانبهترینذخیرهبرایتولیدانرژی،غذاوموادشیمیاییموردنیازانساندرنظرگرفتهشود.هیدرولازکاملآنزیمیموادسلولزی نیازمندوجودیکسیستمپیچیده یآنزیمیوهمکاریسهآنزیممختلفاندوگلوکاناز،اگزوگلوکانازوبتاگلوکوزیدازاست.تا به امروز ژن های بتاگلوکوزیداز با ویژگی های مختلف از انواع میکروارگانیسم ها...

15 صفحه اول

شناسایی، همسانه سازی وتعیین توالی ژن MT ND2 در مرغ‌های بومی خراسان

میتوکندری مسئول تولید 90 درصد از انرژی مورد نیاز سلول می باشد. مقداری از تفاوت‌ها در عملکرد رشد جوجه‌های گوشتی و بیان فنوتیپی راندمان غذایی ممکن است مربوط به اختلاف در راندمان عملکرد میتوکندری باشد. این پژوهش بمنظور همسانه سازی و تحلیل مرغان بومی خراسان با تاکید بر ژن ND2  به منظور بررسی جهش­های احتمالی است. بدین منظور از نمونه خون مرغ بومی خراسان، DNA ژنومی استخراج گردید و با استفاده از آغازگ...

full text

همسانه سازی و بیان ژن پروتین غشای خارجی 31 (Omp31) باکتری بروسلا ملیتنسیسRev1

بیماری بروسلوز به عنوان یک بیماری مشترک بین انسان و دام به واسطه تکثیر باکتری بروسلا در داخل سلول‌های پستانداران اتفاق می‌افتد. Omp31 یکی از پروتئین‌های غشای خارجی این باکتری می‌باشد که به واسطه نقش مهمی که در تحریک سلول‌های CD8+ T و CD4+ T دارد می‌تواند سبب مهار بیماری بروسلوز گردد. در این بررسی ژن Omp31 به عنوان یکی از ژن های موثر در بیماری بروسلا مورد بررسی مولکولی از نظر آنالیز فیلوژنی و هم...

full text

جداسازی، همسانه سازی و بیان ژن زیرواحد آلفا فیکوسیانین در سیستم بیانی اشرشیاکلی

فیکوسیانین رنگدانه آبی رنگی است که در دو گروه از جلبک ها و سیانوباکترها ازجمله Spirulina وجود دارد. این رنگدانه دارای فعالیت های متنوع زیستی است و کاربردهای گوناگونی در صنعت غذایی، آرایشی و دارویی دارد. پیشرفت های زیادی جهت تولید فیکوسیانین در مقیاس بالا انجام شده است، اما اغلب روش ها مشکل و با هزینه های بالایی قابل انجام هستند؛ درصورتی که همسانه سازی و بیان فیکوسیانین به صورت نوترکیب روشی ارزا...

full text

جداسازی، همسانه سازی و بیان ژن های کدکننده ی گلوکان سوکرازهای باکتری lactobacillus sp. در گیاه چغندرقند

گلوکان سوکرازها (gss) یا گلیکوزیل ترانسفرازها (gtfs)، آنزیم های برون سلولی بزرگی هستند که قادرند گلوکان های مختلفی (دکستران، موتان، آلترنان و روتران) را از ساکارز تولید کنند. باکتری های اسیدلاکتیک قادر به تولید این آنزیم ها هستند که به طور سنتی در مواد غذایی و محصولات تخمیری وجود دارند. با توجه به خواص بسیار زیاد و مفید این باکتری ها در زندگی و سلامت انسان، جداسازی و شناسایی این باکتری ها به وی...

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه اصفهان - پژوهشکده فناوری های نو

Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023